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BEX Co., Ltd.

Straight Walk® kit

Straight Walk®キットの特長

cDNAやゲノミックDNAの既知の配列から、未知の領域をクローニングする方法は複数あります。その一つとして、制限酵素処理をした後にアダプターを結合させ、既知配列とアダプターにプライマーを設定してPCRを行う方法があります。 Straight Walk® Kit(旧Right Walk® Kit)は、特異性を高めるアダプターを使用することにより、ヒトの10倍のゲノムサイズをもつサンプルからも 未知領域をクローニングすることが出来ます。
  • こんな実験にも
    • モデル植物を使って遺伝子組換えをしたが遺伝子がどこに入ったのか判らない、など。

関連特許

新規のオリゴヌクレオチドアダプター及びプライマー (特許4603798号)

Straight Walk®法の原理および作業の流れ

GenomeWalking_by_StraightWalk(BEX co).png
  1. 制限酵素処理
    • 最大9種類の制限酵素サイトの位置により使用できる制限酵素の数が違います。
  2. 1塩基伸長
  3. アダプター結合
  4. 1回目のPCR
  5. 2回目のPCR (nested RCR)
    • 理論上、最大5kb程度の増幅が可能ですが、得られるPCR断片は制限酵素サイトの位置で左右されるため、大きさは様々です。
  6. クローニング
    • ⑤で得られたPCR断片のうち、最も大きいものをクローニングします。
  7. シークエンス

Straight Walk®Kit (Right Walk®Kit)の参考文献

  • Straight Walk:A modified method of ligation-mediated genome walking for plant species with large genomes
    Analytical Biochemistry 388(2009) 158-160:
    Tokuji Tsuchiya, Nanako Kameya, Ikuo Nakamura
  • De novo DNA methylation of the 35S enhancer revealed by high-resolution methylation analysis of an entire T-DNA segment in transgenic gentian
    Plant Biotechnology 28,223-230(2011)
    Satoshi Yamasaki, Masayuki Oda, Nozomu Koizumi, Kazuhiko Mitsukuri, Masafumi Johkan, Takashi Nakatsuka, Masahiro Nishihara, Kei-ichiro Mishiba
  • Novel Isoforms of Heat Shock Transcription Factor 1 Are Induced by Hypoxia in the Pacific Oyster Crassostrea gigas
    J.Exp.Zool. 315:394-407,2011
    SHINYA KAWABE AND YOSHIHIRO YOKOYAMA

Straight Walk® Kitの内容

SWA- 1 (Straight Walk Adaptor-1)ライゲーション12 回分
SWA- 2 (Straight Walk Adaptor-2)ライゲーション12 回分
WP- 1 (Walking Primer- 1)PCR 48 回分
WP- 2 (Walking Primer- 2)PCR 48 回分
λDNA 1 PCR Primer8 回分
λDNA 2 PCR Primer8 回分
dGTPおよびdCTP各12 回分

Straight Walk® Kitの価格

Cat.No.製品名価格
02-0201Straight Walk® kit¥25,000
  • 本キットを使用した受託サービスも行っております。